总 RNA 提取试剂
Total RNA Isolation Reagent 本产品常温运输；避光保存于 4 ~ 25℃，保质期 24 个月。
货号规格
YY101： 100 mL
YY101L： 100 mL×5
产品特点
色彩鲜艳——便于区分水相和有机相的分界面，方便吸取上清；
高性价比——产品质量丝毫不逊色于进口同类产品，而价格仅为其一半左右。
产品简介
雅酶生物的总 RNA 提取试剂适用于从细胞和组织中快速分离 RNA/DNA/蛋白质。整个实验过程操作简
单省时，所提取的 RNA 纯度高，可用于 Northern Blot、PolyA RNA 富集、体外翻译、RNase 保护分析、
反转录等下游实验。本品含有苯酚，如不慎接触皮肤，应立即用大量流水冲洗。
使用说明
请确保您所使用的离心管、移液器吸头以及其它器皿未被 RNase 污染。金属和玻璃制品可在 200℃烘
烤 2 h 以上。塑料制品和水可用 0.01%的 DEPC 水浸泡过夜，高压灭菌。所有溶液应使用 DEPC 处理后的
水配制。
分离 RNA
1. 裂解匀浆：
A．组织样品 将组织用液氮在研钵中速冻后，碾磨成极细的粉末，期间应不断添加液氮，保持组
织样品处于冷冻状态。按 50 ~ 100 mg 组织加入 1 mL 总 RNA 提取试剂（样品体积不应超过试剂
体积的 10%），此时总 RNA 提取试剂由于低温会凝固。继续研磨，尽量将凝固的试剂在其融化前
磨成粉末，以使总 RNA 提取试剂和组织粉末尽快混合充分。几分钟后，随着研钵的温度上升，总
RNA 提取试剂会慢慢融化。充分研磨匀浆样品后，将裂解液转移到一个 1.5 mL 的离心管内。如
使用的组织为容易匀浆的样本，如大脑、肝脏等，可直接用玻璃匀浆器匀浆。
B．贴壁培养的细胞 吸去培养板中的培养基，按每 10 cm2（相当于一个 3.5 cm 直径的培养皿或 6
孔板的一个孔的面积）培养面积直接加入 1 mL 总 RNA 提取试剂。晃动培养板，使总 RNA 提取
试剂反复流过培养细胞的表面，待所有贴壁的细胞裂解后，将裂解液转移到一个 1.5 mL 的离心管
内。
C．悬浮培养的细胞 离心收集细胞（无需洗涤细胞，洗涤细胞的过程极有可能会使 RNA 降解），
按每 5 ~ 10×106个动物、植物、酵母细胞或 1×107个细菌细胞加入 1 mL 总 RNA 提取试剂，反
复吹打，使细胞分散裂解。一些酵母细胞或细菌细胞可能需要用匀浆仪处理。
2. 裂解后的匀浆液于室温放置 5 min，使核酸和蛋白质复合体完全分离；
3. 可选：如样品中含有较多组织碎片或多糖等不溶物质（常见于抽提植物组织 RNA 时），可于 4℃
12,000 g 离心 10 min，取上清液进行下一步操作；
4. 按每使用 1 mL 总 RNA 提取试剂加入 0.2 mL 氯仿，剧烈震荡混匀 15 s，室温放置 3 ~ 5 min；
5. 于 4℃ 12000 g 离心 15 min。样品将分为三层：下层为绿色有机相，上层为无色水相，中间层为
白色的 DNA 和蛋白质；
6. 吸取上层水相，转移到一个干净的离心管中。加入等体积异丙醇，室温放置 10 min 沉淀 RNA。小
分子 RNA（如 microRNA 等），在异丙醇沉淀过程中会大量丢失，因此如希望回收 microRNA 等
小分子 RNA，可改用 2.5 倍体积乙醇，于-20℃沉淀 30 min 以上。如需同时纯化 DNA 和蛋白质，
请保留有机相和中间层；
7. 于 4℃ 12,000 g 离心 10 min，收集沉淀。离心后，管底和管侧可见白色或半透明状 RNA 沉淀。
弃上清；
8. 用 1 mL 75%乙醇洗涤 RNA 沉淀。于 4℃ 12000 g 离心 10 min，弃上清；
9. 将离心管放回离心机轻甩几秒，使残留在管壁的乙醇溶液集中到管底，用移液器吸头小心吸去残
余的乙醇溶液；
10. 打开离心管管盖，室温晾干 RNA 沉淀。一般 3 ~ 5 min 即可。加入适量无 RNase 的水溶解沉淀。
分离 DNA
1. 在上述分离 RNA 第 6 步的有机相和中间层中，按每使用 1 mL 总 RNA 提取试剂加入 0.3 mL 无水
乙醇，混匀，室温放置 3 min，于 4℃ 12,000 g 离心 5 min；
2. 将上清转移到一个干净的离心管内，以备后续分离蛋白。DNA 沉淀用含 10%乙醇的 0.1 M 柠檬酸
钠溶液充分洗涤。按每使用 1 mL 总 RNA 提取试剂加入 1 mL 洗涤液，室温放置 30 min，于 4℃
12,000 g 离心 5 min，弃上清，重复一次；
3. 用 75%乙醇洗涤沉淀。按每使用 1 mL 总 RNA 提取试剂加入 1.5 mL 75%乙醇，室温放置 10 ~ 20
min，期间不时颠倒混匀。于 4℃ 12000 g 离心 5 min，弃上清；
4. 室温晾干 DNA 沉淀。用 8 mM 的 NaOH 溶液溶解 DNA；
5. 将 DNA 溶液 pH 调整至 7.5。按每 1 mL 8 mM NaOH 溶液加入 160 µL 0.1M 的 HEPES 溶液。
分离蛋白质
1. 取沉淀 DNA 后的上清，按每使用 1 mL 总 RNA 提取试剂加入 1.5 mL 异丙醇，室温放置 10 min，
于 4℃ 12,000 g 离心 5 min，弃上清；
2. 用含 0.3 M 盐酸胍的 95%乙醇洗涤蛋白质沉淀。按每使用 1 mL 总 RNA 提取试剂加入 2 mL 洗涤
液，室温放置 20 min，于 4℃ 7500 g 离心 5 min，弃上清。重复两次后，用 2 mL 无水乙醇再洗
一次；
3. 晾干沉淀，用 1% SDS 溶液溶解蛋白沉淀，必要时可于 50℃加热助溶。离心，弃不溶物。上清即
可用于 Western Blot 分析。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。本品含有苯酚，如不慎接触皮肤，应立即
用大量流水冲洗；
2. 本产品仅限科研使用。
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