细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
本产品冰袋运输；保存于4℃（其中蛋白酶抑制剂混合液需保存于-20℃），保质期12 个月。
货号规格
PC306： 50 次
产品内容             组分名称                       体积
                          抽提试剂A                      50 ml
                          抽提试剂B                       3 ml
                          抽提试剂C                     25 ml
                          蛋白酶抑制剂混合液     750 μl
产品简介
细胞核/浆蛋白抽提试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白，
所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后
通过离心得到细胞核沉淀。最后通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋
白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western Blot、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力
测定等后续操作。
使用说明
◈ 细胞中胞浆、胞核蛋白的提取：
1. 请在蛋白抽提前取出抽提试剂A 和抽提试剂B 进行预冷；
2. 收集细胞，计数。离心去上清；
3. 1×107 细胞中加入1 ml 抽提试剂A（在使用前2~3 min 按照1:100 加入蛋白酶抑制剂混合液），
涡旋5 s 以充分混匀，冰上孵育20 min；
注意： 各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整抽提试剂A 的用量，如果蛋白浓度
小， 按比例减少抽提试剂A 及后续抽提试剂B 、抽提试剂C 的用量。
4. 加入55 μl 抽提试剂B ，涡旋5 s 以充分混匀，冰上孵育1 min；
5. 4℃ 14,000 g 离心15 min，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此
提取液为胞浆蛋白）；
6. 向上步所得的沉淀中加入500 μl 抽提试剂C（在使用前2~3 min 按照1:100 加入蛋白酶抑制剂
混合液），涡旋5 s 以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40 min，每隔10 min 涡旋混匀一次，每次
约15~30 s；
7. 4℃ 14,000 g 离心15 min，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此提
取液为胞核蛋白）。
◈ 组织中胞浆、胞核蛋白的提取
1. 请在蛋白抽提前取出抽提试剂A 和抽提试剂B 进行预冷；
2. 称组织重量，每100 mg 组织中加入1 ml 抽提试剂A （在使用前2~3 min 按照1:100 加入蛋白酶抑制剂混合液），用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵育20 min；
注意：各种组织的特性不同，需要根据不同组织调整抽提试剂A 的用量，如果蛋白浓度小，按比
例减少抽提试剂A 及后续抽提试剂B 、抽提试剂C 的用量。
3. 加入55 μl 抽提试剂B ，涡旋5 s 以充分混匀，放置在冰上孵育1 min；
4. 4℃ 14,000 g 离心15 min，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此
提取液为胞浆蛋白）；
5. 向上步所得的沉淀中加入500 μl 抽提试剂C（在使用前2~3 min 按照1:100 加入蛋白酶抑制剂
混合液），涡旋5 s 以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40 min，每隔10 min 涡旋混匀一次， 4℃
14,000 g 离心15 min，收集上清（尽量收集干净上清液）至新的离心管中，-20℃保存（此提取液
为胞核蛋白）。
注意事项
1. 如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂混合液（货号：GRF102）；
2. 为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行；
3. 可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为抽提试剂A : 抽提试剂B : 抽提试剂C
=100 : 5.5 : 50；
4. 可以采用更高的速度来离心；
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
6. 本产品仅限科研使用。