柱式动物组织/细胞总蛋白抽提试剂盒
Column Tissue&Cell Protein Extraction Kit
本产品常温运输（蛋白酶抑制抑混合物需冰袋运输）；天然裂解液储存于4℃，蛋白酶抑制抑混合物储存于
-20℃，其它组分储存于常温。保质期12 个月。
货号规格
PC201： 50 次
PC201plus： 50 次（含蛋白酶抑制抑混合物）
产品内容
组分名称PC201 PC201plus
变性裂解液25 ml 25 ml
天然裂解液25 ml 25 ml
蛋白酶抑制剂混合物无500 μl
纯化柱50 个50 个
收集管50 个50 个
塑料研磨棒4 根4 根
产品特点
操作简单快速——1 min 可以得到变性总蛋白；
无蛋白丢失——可打开DNA 双链，高效获取与DNA 结合的蛋白；
小样本量，高得率——最小可处理20 μl 样本与裂解液混合物，提取的蛋白溶液浓度可达2~8 mg/ml；
适用多种实验——含有两种裂解液，既可用于提取变性蛋白质，也可提取天然蛋白质。
产品简介
本试剂盒创新性地采用过柱纯化的方法，能够快速、温和、高效地裂解动物组织或细胞，有效提取总
蛋白。试剂盒同时提供变性和天然两种裂解液，用户可根据下游实验需求进行选择。整个提取过程仅需要
1~8 min，由于采用过柱纯化技术，最小可处理20 μl 样本与裂解液混合物，最大可达500 μl，提取的蛋白
溶液浓度可达2~8 mg/ml，并可有效避免蛋白丢失。
使用说明
A. 变性总蛋白提取
1. 将纯化柱及接收管套管放在冰上预冷；
2. 样品处理（PC201plus：取适当量的裂解液，在使用前数分钟内按1:100 加入蛋白酶抑制剂；PC201
则不需要此步操作。）
2a. 贴壁细胞：将预冷的PBS 直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。按
照表格1 中将相应体积的变性裂解液均匀地加入整个器皿表面，用移液器吹打几次。
2b. 悬浮细胞：低速离心收集细胞，在1.5 ml 离心管中加入预冷的PBS，涡旋震荡，3,000 rpm
离心2~3 min 清洗细胞。吸去上清，剩余与细胞体积相同体积的PBS。涡旋震荡重悬细胞。
加入表格1 中相应体积的变性裂解液，涡旋震荡裂解细胞。
注意：部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果。2c. 组织：将15~20 mg 组织放置于纯化柱上，用塑料研磨棒扭转研磨50~60 次，加入200 μl 变
性裂解液，继续研磨30~60 次。如果组织样本起始量较大或者较小，需按比例调整相应裂解
液的用量。
注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。
3. 离心
3a. 贴壁细胞或悬浮细胞：将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中，14,000~16,000 rpm 离心30 s
取出。
3b. 组织：盖上纯化柱盖子室温孵育1~2 min，14,000~16,000 rpm 离心1~2 min 取出。
4. 立刻将收集管放置于冰上，弃去纯化柱，变性总蛋白提取完成。
B. 天然总蛋白提取
1. 将天然细胞裂解液，纯化柱及接收管套管放在冰上预冷；
2. 样品处理（PC201plus：取适当量的裂解液，在使用前数分钟内按1:100 加入蛋白酶抑制剂；PC201
则不需要此步操作。）
2a. 贴壁细胞：将预冷的PBS 直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。按
照表格1 中将相应体积的天然裂解液均匀地加入整个器皿表面，放置于冰上孵育3~5 min，
用移液器吹打几次。
2b. 悬浮细胞：低速离心收集细胞，在1.5 ml 离心管中加入预冷的PBS，涡旋震荡，3,000 rpm
离心2~3 min 清洗细胞。吸去上清，剩余与细胞体积相同体积的PBS。涡旋震荡重悬细胞。
加入表格1 中相应体积的天然裂解液，涡旋震荡裂解细胞15 s。将离心管放置于冰上3~5
min，然后涡旋震荡10 s。
注意：① 部分未完全裂解的细胞不会影响后续蛋白提取效果；
② 加入裂解液后，如果细胞裂解物太过粘稠，无法用200~1,000 μl 吸头吹打，可将细胞裂
解物直接倒入倒入纯化柱中，进行后续操作。
2c. 组织：将15~20 mg 组织放置于纯化柱上，用塑料研磨棒扭转研磨50~60 次，加入200 μl 天
然裂解液，继续研磨30~60 次。如果起始量较大或者较小，需调整相应裂解液的用量比例。
注意：塑料研磨棒可以重复使用， 用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。
3. 离心
3a. 贴壁细胞或悬浮细胞：将裂解后的细胞转移到预冷的纯化柱套管中，14,000~16,000 rpm 离心30 s
取出。
3b. 组织：开盖冰上孵育5 min，盖上纯化柱盖子，4℃，14,000~16,000 rpm 离心1~2 min 取出。
4. 立刻将收集管放置于冰上，弃去纯化柱，天然总蛋白蛋白提取完成。