RIPA 裂解液
RIPA Lysis Buffer
本产品常温运输；保存于4℃，保质期12 个月。
货号规格
PC101： RIPA 裂解液（高强度） 100ml
PC102： RIPA 裂解液（中强度） 100ml
PC103： RIPA 裂解液（弱强度） 100ml
PC104： RIPA 裂解液（强中弱套装） 50ml×3
产品简介
RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白
样品可以用于常规的Western Blot、IP 等实验。RIPA 的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA
裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。用RIPA 裂解液裂解得到的
蛋白样品，可以用雅酶生物（EpiZyme）生产的BCA 蛋白浓度测定试剂盒(ZJ101)测定蛋白浓度。由于含
有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford 法测定由本裂解液裂解得到的样品的蛋白浓度。
使用说明
1. 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内将蛋白酶抑制剂按1:100（V/V）加入其中（蛋白酶抑制剂
需另行购买，货号：GRF101）；
2. 样本裂解：
◈ 对于贴壁细胞：
(1) 弃去培养基，用PBS（或生理盐水、无血清培养液）洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，
可以不洗）；
(2) 尽可能地弃去PBS（多余的液体将降低裂解液的浓度）；
(3) 按照每5×106 细胞需要约200~500 μl 的比例加入RIPA 裂解液，比如6 孔板每孔大约需加
入150~250 μl 裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细
胞1~2 s 后，细胞就会被裂解；
(4) 将所有液体转入新的离心管中。
◈ 对于悬浮细胞：
(1) 将细胞转移至离心管中，离心收集细胞，弃去培养基；
(2) 用PBS（或生理盐水、无血清培养液）洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）；
(3) 尽可能的弃去PBS（多余的液体将降低裂解液的浓度）；
(4) 按照每5×106 细胞需要约200~500 μl 的比例加入RIPA 裂解液，比如6 孔板每孔细胞量大
约需加入150~250 μl 裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。充分裂解后
应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成5×105~1×106 个细胞/管，然后再
裂解。
◈ 对于组织样品：
(1) 把组织剪切成细小的碎片；
(2) 按照每20 mg 组织加入150~250 μl 裂解液的比例加入裂解液；（如果裂解不充分可以适当
添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
(3) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加
入裂解液裂解，通过强烈涡旋振荡使样品裂解充分。直接裂解的优点是比较方便，不必使
用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器裂解得充分。
3. 充分裂解后，10000~14000 g 离心3~5 min，小心地将上清液（蛋白样品）移入新的离心管中，即
可进行后续的PAGE 凝胶电泳、Western Blot 和免疫沉淀等操作。得到的蛋白样品可分装并长期保
存于-80℃。
注意事项
1. 裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出，使用前应该37℃水浴重新溶解完全后回复到室温使用；
2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行；
3. RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组
DNA 等的复合物。在不检测和基因组DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用
于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶
状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53 等时，
通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子；
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
5. 本产品仅限科研使用。